应用程序

自动化PCR Prep.

OT-2自动PCR制备(2:32)

概述

PCR和qPCR反应的自动制备是Opentrons平台上最流行的单一应用,全世界数百名生物学家需要并使用它。这种工作的协议提供了有价值的数据,但需要重复和精确的液体处理来建立-使它成为一个完美的自动化实验室过程。


自动化这一过程的最有效的方法是OT-2将样品和PCR混合料结合在反应板中,然后进入热循环器或qPCR机。mastermix应该在这个过程之前准备好,可以用手,也可以用OT-2机器人。下面是关于这个过程的更多细节。

此工作流可用于以下应用程序:

  • 基因表达(qPCR)
  • NGenotyping(检测)
  • 放大的克隆
  • 医学、法医学和应用科学

好处

自动化PCR准备带来几个好处,如:

  • 增加的速度
  • 最大的精确度
  • 增加数据一致性,可靠性
  • 精确的移液,步骤更少
  • 在一次测试中准备数百个样品

工作流

在OT-2上的PCR制剂允许简化的工作流,其能够适应低和高通量PCR实验。精确,高产PCR实验的实例如下技术说明所示,以及有效适应OT-2上的PCR实验的重要参数。自动化此过程的最有效方法是OT-2将样品和PCR MasterMix组合在反应板中,因此它们可以进入您的热循环仪或QPCR机器。使用MasterMix应在此过程之前,手动或OT-2在此过程之前进行。下面是关于这个过程的更多细节。

指令
1

设计你的协议

使用协议设计器开始从头开始,或使用协议库模板必威体育2021欧洲杯官网

2

将试剂放到机器人上

把预先准备好的PCR mastermix放在机器人上——或者让OT-2为你做。混合母版与正向和反向底漆。

3.

校准和激活协议

确认移液位置并命中“运行”(需要<5分钟)

4

负载热循环和运行

在OT-2准备好所有反应后,运行PCR机器

验证

此应用程序已经过充分测试和科学验证的Opentrons。

应用程序数据

Opentrons Thermocycler能够在96口井中获得统一的PCR产物。这与市场上的其他热循环器竞争非常激烈,其CV仅为10.1%(表1),而许多竞争对手的平均CV为10.3%(1)。对于研究人员来说,为了比较整个Opentrons温度计中不同实验和样品的结果,这种井与井之间的一致性至关重要。

Thermocycler模型 体积 简历(%)
opentrons. 25μl. 10.1
opentrons. 10μL 15.2
opentrons. 50μL 11.5
B公司 10μL 14.9
B公司 100μl. 15.1
公司T 10μL 22
公司T 100μl. 21.6
表1。在opentron热循环仪上产生高度均匀的PCR产物。扩增在10 ~ 50 μL反应体积的Nest全边板中完成。下表为不同体积下的CV%,以25 μL为最佳。

笔记

试剂

使用含有聚合酶、dNTPs和缓冲液等多种PCR成分的母粒,减少了运行时间和移液步骤。“超级混合底漆”包括混合底漆和正向底漆和反向底漆,减少了移液步骤,每个样品只需要一个针尖。我们推荐这种简化的方法在OT-2上建立PCR。PCR条带和96孔PCR板中的样本可以放在预冷的铝块中。试剂可以保持在4ºC上温度模块 在OT-2运行协议时。

实验室的器具

OT-2支持PCR的各种LabWare。我们推荐96孔全缘PCR板 便于在甲板上安全放置。由于PCR板的尺寸多种多样,我们鼓励用户找到一个与您已有的实验室设备定义紧密匹配的实验室设备。另外,在我们的软件中定义的几个PCR实验室示例如图1所示。另外,实验室的器具。create’命令可以用来输入PCR板的准确尺寸。指的是必威体育打水套利 有关OT-2上支持和自定义实验软件的更多详细信息。

吸量管

单通道和多通道的p10、p50和p300移液管可以容纳10 ~ 200 μL的总反应量。有关我们的移液器和低至1 μL的移液量的更多信息,请参阅我们的OT-2移液管白纸。

我们的社区

探索其他实验室如何使用OT-2实现自动化
预算科学

“我已经完成了,我不知道我生命中有多少微型手术。我不想再做3,000人。“

尼克金刚砂

波士顿大学的潮湿实验室

黑客的灵活性

“我们选择了两种原因,我们选择了Opentrons:它是价格实惠的,我们可以为它开发开源软件。”

Keoni Gandall

免费的基因工程

样品管理

“有时候,我们让Opentrons转移了800个样品。我不可能手工做那么多样品。”

Kaja沃斯克

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